Elektroforéza, co to je, k čemu slouží a jak se to dělá

Elektroforéza je laboratorní technika prováděná s cílem separovat molekuly podle jejich velikosti a elektrického náboje, aby bylo možné stanovit diagnózu onemocnění, ověřit expresi proteinu nebo identifikovat mikroorganismy.

Elektroforéza je jednoduchý a levný postup, který se používá v laboratorní rutině a ve výzkumných projektech. Podle účelu elektroforézy může být nutné provést další testy a zkoušky k dosažení diagnózy, například.

K čemu to je

Elektroforéza může být prováděna pro různé účely, jak ve výzkumných projektech, tak v diagnostice, protože jde o jednoduchou a nízkonákladovou techniku. Elektroforéza tedy může být provedena:

• Identifikujte viry, houby, bakterie a parazity, přičemž tato aplikace je běžnější ve výzkumných projektech;
• Test otcovství;
• Zkontrolujte expresi proteinů;
• Identifikujte mutace, které jsou užitečné například při diagnostice leukémie;
• Analyzujte typy cirkulujícího hemoglobinu, které jsou užitečné při diagnostice srpkovité anémie;
• Zhodnoťte množství bílkovin přítomných v krvi.

Podle účelu elektroforézy může být pro dokončení diagnózy nezbytné provést u lékaře další doplňkové testy.

Jak se to dělá

K provedení elektroforézy je nutné kromě UV světelného zařízení, které je také známé jako transiluminátor, být gel, který může být z polyakrylamidu nebo agarózy v závislosti na objektivu, elektroforetickém pufru a kádě, markeru molekulové hmotnosti a fluorescenčním barvivu..

Po přípravě gelu je nutné umístit specifický předmět tak, aby se jamky vytvořily v gelu, populárně nazývané hřeben, a nechal gel ztuhnout. Když je gel připraven, naneste látky do jamek. Za tímto účelem musí být do jedné z jamek umístěn marker molekulové hmotnosti, pozitivní kontrola, což je látka, která je známa, co to je, negativní kontrola, která zaručuje platnost reakce, a vzorky, které mají být analyzovány. Všechny vzorky musí být smíchány s fluorescenčním barvivem, protože je tak možné vizualizovat pruhy na transiluminátoru.

Gel se vzorky musí být umístěn do elektroforézní vany, která obsahuje specifický pufrovací roztok, a poté je zařízení zapnuto tak, aby byl přítomen elektrický proud a následně potenciální rozdíl, který je důležitý pro separaci částice podle jejich zatížení a velikosti. Elektroforetická doba chodu se liší podle cíle postupu a může trvat až 1 hodinu.

Po stanovené době je možné zobrazit výsledek elektroforetického běhu přes transiluminátor. Když je gel umístěn pod UV nebo LED světlem, je možné vizualizovat pruhovací vzorec: čím větší je molekula, tím menší je její migrace, přibližuje se k jamce, zatímco čím je molekula lehčí, tím větší migrační potenciál.

Aby byla reakce validována, je nutné, aby pruhy pozitivní kontroly byly vizualizovány a aby v negativní kontrole nebylo nic vizualizováno, protože jinak to znamená, že došlo ke kontaminaci a celý proces musí být opakován..

Druhy elektroforézy

Elektroforéza může být prováděna pro různé účely a podle svého účelu může být použito několik typů gelů, z nichž nejčastější jsou polyakrylamid a agaróza.

Elektroforéza k identifikaci mikroorganismů je běžnější ve výzkumných laboratořích, avšak pro diagnostické účely může být elektroforéza použita k identifikaci hematologických onemocnění a chorob, které se vyvíjejí se zvyšováním množství proteinů, což jsou hlavní typy elektroforézy. :

1. Hemoglobinová elektroforéza

Hemoglobinová elektroforéza je laboratorní technika prováděná k identifikaci různých typů hemoglobinu cirkulujícího v krvi, což umožňuje identifikovat přítomnost onemocnění souvisejících s syntézou hemoglobinu. Typ hemoglobinu je identifikován elektroforézou při specifickém pH, ideálně mezi 8,0 a 9,0, přičemž je ověřen vzorec pruhů, který lze porovnat s normálním vzorcem, což umožňuje identifikaci přítomnosti abnormálních hemoglobinů..

K čemu je vyroben: Elektroforéza hemoglobinu se provádí za účelem zkoumání a diagnostiky nemocí souvisejících s syntézou hemoglobinu, jako je srpkovitá anémie a nemoc hemoglobinu C, kromě toho, že je užitečná při diferenciaci thalassémie. Naučte se, jak interpretovat elektroforézu hemoglobinu.

2. Proteinová elektroforéza

Elektroforéza na proteinech je zkouška, kterou požaduje lékař k posouzení množství proteinů cirkulujících v krvi, a tedy k identifikaci nemocí. Tento test se provádí ze vzorku krve, který se odstředí za účelem získání plazmy, přičemž část krve sestává mimo jiné z bílkovin.

Po elektroforéze je možné zobrazit pruhy a následně graf, ve kterém je uvedeno množství každé frakce proteinů, což je pro diagnostiku zásadní.

K čemu je vyroben: Proteinová elektroforéza umožňuje lékaři vyšetřit výskyt mnohočetného myelomu, dehydratace, cirhózy, zánětu, onemocnění jater, pankreatitidy, lupusu a hypertenze podle vzoru proužku a grafu uvedeného ve zprávě o vyšetření.

Pochopit, jak se to dělá a jak porozumět výsledku elektroforézy proteinů.