Molekulární diagnostika co to je, za co je a jak se to dělá
Molekulární diagnostika odpovídá souboru molekulárních technik, jejichž cílem je identifikovat změny v DNA, které by mohly například naznačovat genetická onemocnění nebo rakovinu. Molekulární techniky se navíc široce používají k identifikaci a potvrzení infekčních chorob, protože představují rychlejší a přesnější diagnostickou metodu.
Molekulární diagnostika je nákladná, a proto ji lékaři často nevyžadují, poskytuje však přesné výsledky, pokud jde o přítomnost změny, způsob, jakým může narušit fungování organismu a reakci pacienta na léčba.
K čemu to je
Molekulární diagnostika může být prováděna s několika cíli, z nichž hlavní jsou:
- Identifikace mutací souvisejících s leukémie, jako je identifikace translokace BCR-ABL, která je charakteristická pro chronickou myeloidní leukémii (CML);
- Charakteristické mutace hematologické choroby, jako je dědičná hemochromatóza, polycythemia vera, esenciální trombocytémie a trombofilie, například.
- Molekulární změny, které naznačují výskyt rakovina, jako je například kolorektální karcinom, rakovina plic, prsu a mozku;
- Diagnóza infekční choroby, jako je hepatitida, uretritida, toxoplasmóza, leishmanióza atd., kromě HPV virus.
Molekulární diagnostika, i když je považována za nákladnou ve srovnání s jinými diagnostickými technikami, je přesnější, protože je schopna informovat, která změna souvisí s určitým onemocněním a stupeň vlivu této změny v organismu, a tak pomáhá při léčbě osoby.
Kromě toho, že se používají k diagnostice několika nemocí, používají se molekulární techniky také k hodnocení reakce na léčbu, zejména u lidí s rakovinou, což je jedna z nejúčinnějších metod pro indikaci progrese a relapsu onemocnění.
Jak se to dělá
Molekulární diagnostika může být provedena s jakýmkoli vzorkem, na žádost lékaře, který může nejlépe poskytnout informace o stavu pacienta, kterým může být moč, slina nebo ve většině případů krev. Půst nebo jakákoli jiná příprava není pro zkoušku nutná.
Vzorek se odebere a zašle do laboratoře spolu s pokyny lékaře informující o zkoušce nebo typu výzkumu, který by měl být proveden. Provedená molekulární technika závisí na požadované zkoušce a zahrnuje řadu přesných postupů, jejichž cílem je identifikovat přítomnost nebo nepřítomnost změny požadované lékařem..
Obvykle se používá pouze malé množství odeslaného vzorku, zbytek se uloží tak, aby se zkouška v případě potřeby opakovala.
Podívejte se, jaké jsou hlavní molekulární techniky
PCR
A PCR, zkratka pro polymerázovou řetězovou reakci nebo Polymerázová řetězová reakce, je molekulární technika, která spočívá v amplifikaci fragmentu genetického materiálu, ať už DNA nebo RNA, za účelem identifikace mutací a tím i při diagnostice onemocnění.
Tato technika se provádí extrakcí a čištěním genetického materiálu, který se potom umístí do směsi, ve které je jednou ze složek restrikční enzym, který se mění podle požadovaného testu a jehož funkcí je rozřezat materiál na fragmenty aby bylo možné identifikovat možnou genetickou změnu. Směs se umístí do termocykleru, což je zařízení, které působí prostřednictvím teplotní změny uvedené odborníkem podle zkoušky a umožňuje tak amplifikaci genetického fragmentu. V případě konvenční PCR je produkt PCR po amplifikaci podroben elektroforéza, což je molekulární technika založená na hmotnosti a velikosti fragmentů, to znamená, že podle těchto charakteristik se vytvoří vzor pásů, jejichž analýza se provádí na základě pozitivního kontrolního pruhu, tj. známého pruhu což odpovídá genetické změně.
A Real-time PCR, nazývá se také qPCR, jedná se o typ kvantitativní PCR, to znamená, že kromě identifikace genetické alterace je schopen poskytnout informace o genové expresi, tj. o tom, do jaké míry je pozměněný gen exprimován v organismu, a proto může být používá se k podpoře diagnostiky a sledování léčby. Real-time PCR nevyžaduje elektroforézu, celý proces amplifikace a analýzy genetického materiálu se provádí pomocí zařízení a výsledek je interpretován vyškoleným zdravotníkem.
Sekvenování
sekvenování je molekulární technika, která spočívá v určení sekvence DNA nukleotidů, které jsou formujícími jednotkami genetického materiálu. K sekvenování dochází při reakci podobné PCR, avšak v amplifikační směsi jsou modifikované nukleotidy přidány přidáním fluorochromů, které, jak je materiál amplifikován, jsou modifikované nukleotidy začleněny do DNA a vytvářejí několik fragmentů, které odpovídají produktu pro sekvenování.
Reakční produkt je umístěn do zařízení zvaného DNA sekvencer, ve kterém, jakmile jsou fragmenty dosaženy laserem zařízení, jsou fluorochromy excitovány a emitují fluorescenci, která je indikována zařízením pomocí píku, přičemž každý pík odpovídá na nukleotid. Na konci reakce bude zařízení informovat o sekvenci DNA, takže bude schopno pomoci lékaři při diagnostice genetických chorob..
